你只知道ELISA？
在生命科學(xué)領(lǐng)域多種情況下，及時(shí)、高效、經(jīng)濟(jì)地測定和量化樣品中存在的抗原或抗體是至關(guān)重要的環(huán)節(jié)。
酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)已被證明是非常寶貴的研究和診斷工具， 通過將已知的抗原或抗體吸附在固相載體表面，使酶（主要是HRP）標(biāo)記的抗原抗體反應(yīng)在固相表面，從而測量生物樣品中的抗體或抗原。
ELISA原理示意圖
傳統(tǒng)ELISA避免了同位素的使用，消除了安全性的隱患，但外部條件對溶液顏色變化的影響巨大且OD值有效的線性范圍過低，ELISA檢測的靈敏度和動(dòng)態(tài)范圍大大受制于光吸收技術(shù)的缺陷。
1982年Halonen等人在J Clin Microbiol雜志上發(fā)表了題為” Time-resolved fluoroimmunoassay: a new test for rubella antibodies” 的文章，標(biāo)志著免疫檢測正式跨入熒光時(shí)代，這也是DELFIA技術(shù)的原型。
簡單來說，DELFIA相比傳統(tǒng)ELISA實(shí)驗(yàn)有兩個(gè)區(qū)別：
1. 檢測抗體上的酶HRP換成鑭系螯合物（(Eu, Sm, Tb, Dy）標(biāo)記。
2. 檢測方式為熒光檢測。
DELFIA原理示意圖
DELFIA中用到的鑭系元素是一類特殊的具有熒光性質(zhì)的元素，這對實(shí)驗(yàn)材料——酶標(biāo)板提出了要求。
絕大多數(shù)ELISA都選擇透明酶標(biāo)板作為作為載體和容器，但發(fā)光反應(yīng)中發(fā)射出的光是各向同性的，光不僅會從垂直方向發(fā)散，還從水平方向發(fā)散出來，很容易的就會通過透明酶標(biāo)板各個(gè)孔之間的間隙和孔壁。相鄰孔之間相互影響，造成結(jié)果失誤。
白色的酶標(biāo)板可用于較弱的光檢測，常用于一般的化學(xué)發(fā)光和底物顯色（如雙熒光素酶報(bào)告基因分析）。
黑色的酶標(biāo)板因其自身會有光吸收，其信號要弱于白色的酶標(biāo)板，一般用于檢測較強(qiáng)的光，如熒光檢測。
? 高結(jié)合力
耐思黑色酶標(biāo)板由非自熒光材料制成，表面經(jīng)處理后，其蛋白結(jié)合能力大大增強(qiáng)，可達(dá)500ng IgG/cm2，主要結(jié)合的蛋白分子量>10kD。
? 背景熒光低，可消除非特異反應(yīng)帶來的問題。
黑色的酶標(biāo)板因其自身會有光吸收，可排除一些較弱的背景干擾熒光。
? 可拆式設(shè)計(jì)
白色酶標(biāo)板框搭配黑色酶標(biāo)板條的可拆式設(shè)計(jì)更便于操作。
當(dāng)需要將板條拆下時(shí)，可從板條正面兩端輕輕向上掰動(dòng)，然后摳取下來，如上圖所示。
若板條太緊難以掰動(dòng)，可用手指抵住板條底部輕輕向上頂，然后如上圖將板條摳取下來。
務(wù)必要戴好無塵手套，以免污染板條而影響板條的透光性。
不可從板條的一端強(qiáng)行掰取，容易造成板條斷裂。
在裝板條時(shí)，要注意方向，板條兩端分別設(shè)計(jì)成方形和半圓形，半圓形那端必須裝在有凸起臺階的卡槽內(nèi)（箭頭所在處），切勿裝反。
將板條裝入板框后，在兩側(cè)和中間部位都需要進(jìn)行按壓，壓實(shí)后方可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
ELISA·DELFIA
