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GelNest? 基質膠
-常見問題與解析-
GelNest?基質膠是由小鼠腫瘤組織中提取的基底膜成分制備而成，包含的主要成分有層粘連蛋白、IV型膠原蛋白硫酸肝素糖蛋白等。這些成分可以提供細胞黏附、分化和增殖所需的支持和信號，同時也可以模擬生理環境中基底膜的特性，提高細胞培養的成功率和效果。
常見Q&A
1.GelNest?高濃度基質膠用于哪些實驗？
GelNest?高濃度基質膠可適用于體內應用研究，如高濃度蛋白可促進腫瘤生長。高蛋白濃度同時可使GelNest?基質膠注射入小鼠皮下后保持完整，有利于注射的腫瘤細胞和/或血管生成因子的原位保持，便于用于原位分析和/或以后的切除。
2.GelNest?基質膠包裝瓶的材質是什么？
GelNest?基質膠選用AccureVial?COP 瓶進行包裝運輸。環烯烴聚合物（COP）瓶作為中硼硅玻璃的替代品，具有極高的設計靈活性，其不易破碎的特點，也降低了物流運輸成本。
COP瓶優勢：
★可耐受-196℃低溫儲存；
★較玻璃材質而言不易破碎；
★低蛋白吸附性；
★可耐受PH值>10的溶液，不易產生脫片，對基質膠進行安全性保護。
3.如何將GelNest?基質膠用于3D培養？怎樣制作3D膠？需要將細胞嵌入到GelNest?基質膠中嗎？
GelNest?高濃度基質膠可適用于體內應用研究，如制備厚層包被用于3D細胞培養。細胞可以嵌在GelNest?基質膠中或者接種在GelNest?基質膠表面（覆蓋法）。
4.使用GelNest?基質膠時，移液器吸頭和離心管需要預冷嗎？
是的。因為GelNest?基質膠在高于10℃的條件下即會開始成膠，我們推薦操作基質膠時使用預冷的移液管、吸頭和離心管。
5.GelNest?基質膠會快速聚合嗎？
GelNest?基質膠在10℃至35℃時會快速聚合成膠。
6.什么情況下，需要使用無酚紅GelNest?基質膠？
對于涉及顏色檢測的實驗，推薦使用無酚紅GelNest?基質膠，如使用熒光染料或Drabkins法計數內皮細胞成管實驗。對于子宮內膜細胞培養，也需使用無酚紅GelNest?基質膠。
此外，酚紅和非甾體雌激素結構類似，有類雌激素效應。在實驗動物體內可能具有干擾內分泌和荷爾蒙代謝的能力。
7.如何從GelNest?基質膠中收獲細胞？
推薦使用中性蛋白酶或細胞回收解決方案來收獲培養在GelNest?基質膠中的細胞。中性蛋白酶相比胰酶、膠原酶或其他蛋白水解酶能夠更溫和有效地獲得單細胞懸液，不會損傷細胞或細胞表面蛋白。對于需要繼續接種培養或進行檢測的細胞，使用中性蛋白酶不會產生損傷。此外中性蛋白酶也可以用于組織分離。
對于代謝研究和RNA抽提，建議在4℃使用細胞回收解決方案進行非酶反應的細胞收集。因為GelNest?基質膠中含有痕量的RNA，進行RNA分析時，應設一個GelNest?基質膠（不接種細胞）的對照組。
其它從GelNest?基質膠中收獲細胞的方法：降低溫度至4℃-6℃使GelNest?基質膠解聚，需要一定的時間并且僅適合一部分應用。
8.GelNest?基質膠包被過的培養皿可以儲存多長時間呢？
包被過的培養皿最好當天使用，具體情況取決于實驗目的。
需要保存的情況下，可在37°C培養箱中最多存放7天。保存時GelNest?基質膠表面需要使用無血清培養基均勻覆蓋，保持濕潤。
9.哪些情況下應該選用薄膠？什么時候用厚膠呢？3D培養有哪些應用？
薄膠主要用于輔助細胞貼壁，有利于細胞增殖。如原代細胞培養，需要一層薄薄的蛋白層輔助，就可以選用薄膠。
厚膠主要用于3D細胞培養，如大鼠主動脈組織分化為毛細血管樣結構（RingAssay），以及進行細胞侵襲實驗等。3D細胞培養實驗，主要是用于研究細胞與細胞間的相互作用以及復雜結構，如生物組織等。
10.進行內皮管形成實驗，應該選用多大濃度的GelNest?基質膠呢？
進行該實驗，GelNest?基質膠最低濃度應不低于10mg/mL。
11.GelNest?基質膠的最低成膠濃度是多少？
不同的實驗目的需要不同的GelNest?基質膠濃度，用戶應該根據具體的實驗需求確定。
GelNest?基質膠最低成膠濃度為7mg/mL。稀釋時不要簡單進行體積倍比稀釋，不同批次間的GelNest?基質膠濃度有差異，應該根據最終工作濃度(mg/mL)算出需要加入的稀釋液體（如PBS或無血清培養基）的量。
用于體內研究的GelNest?基質膠，為了避免成膠不完全，最終工作濃度不應低于10mg/mL。
12.GelNest?基質膠膠塊在體內可以維持多長時間？
基質膠膠塊可以在體內維持至少一周的時間。
13.怎樣稀釋GelNest?基質膠?
使用冰上預冷的無血清培養基或者PH=7.4的PBS。
14.應該如何對GelNest?基質膠移液操作?
推薦使用預冷的移液器或者注射器操作，移液管、槍頭同樣需要預冷。吸液時不要觸及瓶子底部；分液時切忌過快、用力過猛。
如果使用移液管（Pipets），需要分液5mL時，應該吸取6mL，分液到移液管內仍有1mL時即停止；如果使用自動移液器（Pipetman），按壓到第二檔位吸液，然后按壓到第一檔位進行分液。
15.為什么我的GelNest?基質膠很粘稠？
基質膠的蛋白濃度越高，膠體越粘稠。如果濃度高于13.0mg/mL，基質膠會顯得非常厚重。
GelNest?基質膠產品在未稀釋前都會比較粘稠。粘稠的高濃度GelNest?基質膠不稀釋也可以直接使用，如用于培養腫瘤細胞和/或血管生成因子，注射于小鼠體內后，細胞可以保持原位，便于原位分析和/或以后的切除；或者稀釋后，按照標準濃度的GelNest?基質膠產品使用方法使用，具體稀釋濃度根據實驗需求確定。
除因為產品本身濃度高而粘稠外，基質膠的狀態還與運輸過程中溫度的變化和儲藏條件有關。整個運輸過程中必須使用干冰冷藏。如果儲藏GelNest?基質膠的冰箱帶有自動除霜功能，冰箱除霜過程中升溫，可能使基質膠成膠。所以，切忌將GelNest?基質膠儲藏于此類冰箱中。
為保證GelNest?基質膠的使用效果，凍融次數應該盡可能減少。拿到新的GelNest?基質膠后，請按照單次用量進行分裝。每次融化操作，GelNest?基質膠都應該放置于冰上。
16.為什么GelNest?基質膠在37°C成膠，而在4°C時卻呈液體狀態？
GelNest?基質膠是一種從小鼠腫瘤中提取的重組基底膜，新鮮提取的原料中主要包括以下成分：層粘連蛋白，IV型膠原,巢蛋白，基底膜聚糖、表皮生長因子、類胰島素生長因子及其他生長因子。
這些蛋白構成了GelNest?基質膠的基本結構。在22℃-37℃溫度條件下，大分子間的共價鍵可以結合，促使GelNest?基質膠形成凝膠。而在低溫條件（如4℃）下，由于沒有足夠的能量促使共價鍵結合，所以GelNest?基質膠呈現液體狀態。
17.GelNest?基質膠可以反復凍融嗎？
建議用戶第一次融化后按照單次用量進行分裝，保存。
18.為什么細胞沒有貼壁？GelNest?基質膠也脫落了？
首先需要檢查細胞的接種濃度是否過高，GelNest?基質膠的用量應等同于細胞培養體系中培養基的用量。如果GelNest?基質膠被稀釋到過低的濃度，形成的膠體容易從組織培養器皿表面分離。
19.未稀釋的GelNest?基質膠中出現的沉淀應該怎么樣處理？
4℃下低速離心，去除沉淀物。
20.未使用完的GelNest?基質膠應該怎樣保存的？
與細胞培養基或緩沖液混合過但未使用完的GelNest?基質膠，不建議保留再用。
21.GelNest?基質膠可以儲存在-70℃嗎？
是的。GelNest?基質膠可以儲存在-70℃。建議客戶將整瓶的GelNest?基質膠進行分裝，儲存于聚丙烯或其他可以耐受超低溫條件材質的小管中，方便保存和使用。
22.GelNest?基質膠會有自發熒光嗎？
GelNest?基質膠是一種蛋白混合物，所以GelNest?基質膠可能引發熒光的組分為蛋白質成分。如果需要使用熒光檢測細胞生長狀態，建議使用者建立對照實驗，在所需要的波長條件下進行對比，以便排除背景熒光。
23.使用GelNest?基質膠培養的細胞，如果需要進行切片或者免疫組織化學及免疫熒光檢驗，該怎樣固定呢？如何避免解聚？
可以使用2%濃度的多聚甲醛進行固定。為避免固定后出現解聚的情況，可以加入1%濃度的戊二醛。戊二醛作為固定劑，常用于電鏡觀察。
如果用戶需要進行免疫熒光檢驗，加入戊二醛后，會出現明顯的背景熒光。為了解決這一問題，我們建議用戶在固定之后，使用NaBH4進行淬滅。NaBH4極易產生氣泡，進行該步驟時，必須在水平操作臺上小心操作，避免晃動，盡量減少氣泡的形成。另外，用戶也可以嘗試使用較低濃度的戊二醛進行固定，如0.1%到0.5%，濃度越低，背景熒光信號越少。
24.為什么GelNest?的顏色不一樣？
因為二氧化碳和碳酸氫鹽緩沖液及酚紅的反應，冷凍或剛融解的GelNest?都有可能呈現不同顏色，顏色從稻草黃到暗紅色不等。
酚紅在冷凍或者酸性環境下呈現明黃色，在接近生理pH值或0oC以上呈現紅色。
GelNest?出現顏色上的區別是正常情況，不會影響產品質量，并且在和5%的二氧化碳平衡后，會恢復到統一顏色。
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